Подложки со средой для быстрого подсчёта КМАФАнМ

Подложки со средой для быстрого подсчёта КМАФАнМ (количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов)

Способ применения:

Для проведения микробиологического контроля продуктов питания и напитков важно определять количество микроорганизмов, находящихся в них. Подложки  MC-Media Pad Rapid Aerobic Count предназначены для определения КМАФАнМ (количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов). Для этой цели в них используются среда специального состава и уникальные окислительно-восстановительные индикаторные красители, пригодные для проведения не только стандартного, но и ускоренного подсчета. MC-Media Pads, представляют собой предварительно стерилизованные и готовые к использованию сухие подложки для культивирования микроорганизмов, позволяющие упростить проведение испытаний и минимизировать количество отходов. Подложка MC-Media Pad состоит из уникальной адгезивной пленки, самой подложки, пропитанной средой и водопоглощающим полимером, и прозрачной защитной пленки.

Принцип действия:

Подложки MC-Media Pads пропитаны селективной средой для культивирования и хромогенным субстратом для специфичного выявления целевых микроорганизмов. При нанесении образца на подложку жидкость равномерно распределяется и впитывается за счет капиллярного эффекта. Распределение образца по подложке происходит автоматически. В случае присутствия мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, они образуют на подложке колонии красного цвета.

Необходимые материалы:

• Инкубатор (37±1°C или 30±1°C);
• Гомогенизатор;
• Пакет для отбора и гомогенизации образцов. Рекомендовано использовать пакет с фильтром для получения суспензии образца без крупных частиц;
• Пипетка или дозатор с наконечниками;
• Среды для разбавления по выбору: среда MRD (Maximum Recovery Diluent), забуференная пептонная вода (BPW), 2% раствор цитрата натрия (согласно стандарту EN ISO 6887), физиологический раствор, солевой раствор с фосфатным буфером (PBS).

Подготовка образца:

Для твёрдых образцов:

Гомогенизировать 10 г или 50 г исследуемого образца в девятикратном объеме подходящей среды для разбавления (среда MRD, забуференная пептонная вода,  физиологический раствор, солевой раствор с фосфатным буфером  и пр.) в гомогенизаторе.
В случае необходимости приготовить серию десятикратных разведений.

Для молочных продуктов гомогенизировать порцию массой  11 г в 99 мл 2% раствора цитрата натрия при температуре 40-45 °C. В случае необходимости ввести 11 мл гомогенизированной пробы в 99 мл фосфатного буфера для приготовления серии разведений.

Для жидких образцов:

Жидкий образец можно добавлять непосредственно на подложку.
При необходимости жидкий образец может быть разбавлен соответствующим разбавителем.
При необходимости следует довести pH образца до нейтрального значения (pH 7,0±0,2).

В случае питьевого йогурта гомогенизировать порцию объемом 11 мл в 99 мл фосфатного буфера Баттерфилда. В случае необходимости ввести 11 мл гомогенизированной пробы в 99 мл фосфатного буфера Баттерфилда для приготовления серии разведений.

Проведение испытания:

1.Откройте фольгированный пакет и извлеките подложку MC-Media Pad. При необходимости, запишите нужную информацию на защитной пленке.		2. Поднимите прозрачную защитную пленку и пипеткой нанесите 1,0 мл раствора образца на подложку. Рекомендуется поднимать защитную пленку по диагонали для простого и надежного повторного закрывания.
3. Опустите пленку и слегка прижмите её по краям, чтобы плотно закрыть подложку. 4. Инкубируйте подложку при температуре 37 ± 1°C в течение  24 ± 2 часов для ускоренного определения или при температуре 30 ± 1°C в течение  48 ± 2 часов для стандартного определения. Стандартный способ использования применим для всех пищевых продуктов. Для некоторых пищевых продуктов с высоким содержанием молочнокислых бактерий (например, Lactobacillus sp.) или психрофильных бактерий (например, Pseudomonas sp.)  способ ускоренного определения может быть неприменим.		После инкубации следует учесть результаты — подсчитать выросшие на подложке колонии (см. Интерпретация результатов). 5. Запечатайте открытый фольгированный пакет и храните при температуре 2-15°C до 4 недель.

Интерпретация результатов:

• Для определения КМАФАнМ (количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов)
  необходимо провести подсчет всех колоний, имеющих красный (или красноватый) цвет.
• Определенные виды бактерий (в частности штаммы видов Bacillus) могут образовывать диффузные или нечётко
  округлые колонии. В этом случае колониями следует считать тёмные точки.
• При большом количестве колоний можно подсчитать число колоний в одном квадратике разметочной сетки и
  умножить полученное значение на 20.
• Если образец сильно загрязнен – на подложке может быть сплошной рост микроорганизмов.
  В этом случае сложно подсчитать колонии. Тогда следует провести разбавление образца и повторить анализ.
  В случае необходимости целевую колонию можно взять с подложки с помощью стерильной петли для последующего анализа.

Примечание:

• Методика испытания разработана для персонала отдела контроля качества и иных сотрудников, обладающих компетенцией в области исследования образцов, потенциально загрязненных мезофильными аэробными и факультативно-анаэробными микроорганизмами.
• Необходимо использовать средства индивидуальной защиты, такие как перчатки, лабораторный халат и очки. С образцами и обсеменёнными материалами следует обращаться как с источником потенциальной биологической опасности.
• Перед использованием изделия необходимо внимательно ознакомиться с инструкцией.
• Оставшиеся после вскрытия фольгированного пакета неиспользованные подложки следует хранить фольгированном пакете, запечатанном клейкой лентой, в прохладном (2-15°C) месте. После открытия пакета необходимо использовать все подложки в течение 1 месяца.
• Подложки не следует подвергать действию солнечного света или ультрафиолетового излучения.
• Не следует использовать изменившие цвет или поврежденные подложки.
• Образование складок на подложке не оказывает влияние на обнаружение.
• Наличие небольших фрагментов ткани на подложке или около нее  не оказывает влияние на обнаружение.
• Не следует использовать подложки по истечении срока годности. Качество подложек с истекшим сроком годности не гарантируется.
• Предел измерения составляет 300 КОЕ на подложку. Если при подсчете на подложке обнаружено более 300 КОЕ, рекомендуется провести разбавление образца.
• Природа пищевого продукта (вязкие образцы или наличие пищевого красителя) может влиять на результаты исследования. В этом случае следует устранить причины искажения путем разбавления образца или иными способами.
• Используемые инструменты и материалы должны быть обеззаражены путем автоклавирования или кипячения. Утилизацию материалов следует проводить согласно требованиям местных стандартов, регулирующих обработку отходов.